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流式细胞仪技术在淋巴瘤诊断中的应用

发布时间:2015-08-28
        随着新版WHO淋巴造血系统肿瘤新分类标准的普及和应用,免疫表型分析在淋巴瘤分类诊断中成为必不可少的诊断依据。流式细胞分析技术(flow cytometry,FCM)检测与其它免疫学方法相比具有更为迅速、准确、多参数定量等优势,目前是恶性淋巴瘤诊断分类的必备常规手段之一。
     
      1、B细胞淋巴瘤的分析
      FCM是评估B细胞淋巴瘤的重要手段之一。通过检测系列相关抗原表达可以辨识B淋巴细胞,通过检测抗原的表达谱可以鉴别处于不同成熟阶段和不同功能区的B淋巴细胞。成熟B细胞淋巴瘤的主要特征是具有免疫球蛋白轻链的限制性表达(又称为单克隆性表达),或者正常的抗原丧失和异常抗原的出现等。B细胞淋巴瘤是B细胞的克隆性增生,瘤细胞表面免疫球蛋白轻链的表达仅限于一种(κ或λ)。而在良性B细胞增生时,增生的B细胞来源于不同的B细胞克隆,会同时存在κ和λ的表达。因此,免疫球蛋白的限制性表达是FCM在绝大多数B细胞淋巴瘤分析中的重要指标之一。然而,在前B细胞肿瘤和浆细胞肿瘤中没有免疫球蛋白的表达,并且在高度恶性的肿瘤中免疫球蛋白的表达也会减少甚至缺失,滤泡B细胞淋巴瘤也会出现表面轻链表达减弱或缺失的现象,因此免疫球蛋白轻链的限制性表达不是诊断淋巴瘤的绝对指标。
      2、T细胞淋巴瘤的分析
      T细胞淋巴瘤的FCM分析具有更大的挑战性。T细胞淋巴瘤的诊断指征有亚群限制性,正常抗原表达的缺失、异常抗原表达的出现和表达水平的异常等。正常T细胞由CD4阳性和CD8阳性T细胞组成,绝大多数T细胞淋巴瘤为CD4阳性T细胞。但T细胞淋巴瘤细胞要与反应性T细胞群相鉴别。另外,在艾滋病、骨髓移植后或病毒感染情况下,也会出现CD8阳性T细胞占绝对优势的情况。T细胞淋巴瘤的另外一个重要的诊断指标是不能表达某一广谱T细胞抗原, 其中CD7的缺失最为常见,其他还包括CD2、CD5和CD3的缺失。部分T细胞肿瘤可以没有异常抗原的表达,但存在细胞总量的增加。类似于B细胞淋巴瘤,T细胞淋巴瘤也可以存在克隆性增生。通过对T细胞受体基因重组多样性的检测,可以大大提高T细胞淋巴瘤诊断的准确性。
      3、FCM诊断的优势
      淋巴瘤的传统诊断是应用形态学方法及免疫组化方法。FCM的兴起是对淋巴瘤诊断和分型的重要补充。FCM能够快速对大量细胞进行多参数分析,因此FCM较免疫组化分析更为灵敏;另外,其对抗原表达强度的分析方面,也明显优于免疫组化,并可以有效地降低主观性造成的偏差。
      然而,FCM也存在局限性,例如需要新鲜标本,形态学信息受限等,因此淋巴瘤的诊断仍需要将形态学,免疫组化,FCM及分子生物学有效地结合。
     
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